12.03.2019      8      Комментарии к записи Полимеразная цепная реакция гинекология отключены
 

Полимеразная цепная реакция гинекология


Видео: ПЦР – суть и применение

При анализе ПЦР используются принципы молекулярной биологии. При его проведении используются специальные ферменты, многократно копирующие фрагменты РНК и ДНК, а также микроорганизмы, возбуждающие заболевания и находящиеся в биологических материалах человека. Копирование происходит в несколько этапов, поэтому образуется цепная реакция.

После этого специалисты лаборатории делают сверку полученных данных с общей базой и выявляют возбудителей заболевания, а также их концентрацию. Диагностику проводят в специальном приборе, который производит охлаждение и нагревание пробирки с биоматериалом и называется амплификатор. Соблюдение температурного режима влияет на правдивость результатов анализа.

https://www.youtube.com/watch?v=LdKdjhhMAWY

Фрагменты ДНК микроорганизмов могут содержаться в следующих биологических материалах:

  • биологические жидкости;
  • кровь и ее производные;
  • соскоб эпителиальных клеток или мазок;
  • моча;
  • мокрота;
  • слизь и другие биологические выделения;
  • биопаты слизистой оболочки желудочно-кишечного тракта.

ПЦР-исследование – это достижение и огромная заслуга молекулярной биологии. Это – метод, который, обнаружив микроучастки ДНК или РНК  чужеродного генетического материала (генома), способен распознать индивидуальные характеристики, присущие только одному виду микроорганизмов, не спутав его ни с каким другим. Как же работает метод ПЦР и как ему удается восстановить картину поведения инфекционной клетки в живом организме?

Итак, фрагмент нуклеиновой кислоты найден, но он один и для проведения реакции его явно недостаточно, поэтому он кодируется (копирование). Однако для дальнейшего процесса необходимо большое количество таких микроучастков, что может обеспечить его размножение путем достраивания новых, идентичных найденному фрагменту, участков ДНК (репликация).

Размножение является естественным и неотъемлемым свойством нуклеиновой кислоты, которая будет реплицироваться с помощью фермента полимеразы даже вне живого организма (в пробирке с пробой), образуя множество клонов, то есть, пойдет цепная реакция. Клонироваться будут все новые и новые фрагменты, но только те, в которых заинтересован исследователь. Вот почему так важно взять «чистый», без посторонних примесей анализ, а тест проводить очень аккуратно.

Учитывая перечисленные способности полимеразной цепной реакции, можно догадаться, почему она так легко отличает уреаплазму от микоплазмы, или каждую из них от хламидии.

Таким образом, даже если среди миллионов клеток человеческого организма затеряется не сам живой вирус, а лишь частица его ДНК, то ПЦР, если ей ничто не помешает, пожалуй, справится с задачей и сообщит о пребывании «чужака» положительным результатом. В этом суть ПЦР и ее основное достоинство.

Обычно при прохождении анонимного обследования в случае положительных результатов иммуноблотинга, диагностику ВИЧ-инфекции повторяют заново. Если диагноз подтверждается, пациенту назначают дополнительные исследования:

  1. Определение с помощью иммунологических реакций абсолютных значений количества лимфоцитов CD4 (иммунокомпетентные клетки – Т-хелперы или помощники), которые инфекция поражает в первую очередь, после чего они теряют свои основные свойства и не могут отличить «свое» и чужое». Циркулирующую в плазме крови РНК вируса они принимают за нормальные клетки организма и не реагируют на них;
  2. Обнаружение РНК вируса методом ПЦР и расчет концентрации вирусных частиц с целью установления стадии, тяжести патологического процесса и прогноза с учетом этих данных. Разумеется, слово «норма» в этом плане не существует, поскольку реакция всегда положительна, а расшифровка цифровых значений находится в компетенции врача.

ПЦР и гепатиты

Методом ПЦР можно выявлять возбудителей гепатитов, чаще всего тест используется для диагностики С гепатита, который плохо определяется другими методами.

Вирус гепатита С (РНК-содержащий) по своему поведению в организме человека напоминает ВИЧ. Вклиниваясь в геном клеток печени (гепатоцитов), он пребывает там в ожидании своего часа, который может наступить хоть через 2 года, хоть через 20 лет, поэтому медики прозвали его «ласковым убийцей». Гепатит С приводит к формированию злокачественного процесса в печеночной паренхиме, который проявляется на поздних стадиях.

Все эти события иммунная система не замечает, принимая вирус за гепатоцит. Правда, антитела к вирусу в некоторых количествах вырабатываются, однако они не обеспечивают достойный иммунный ответ. Для диагностики ИФА на гепатит С не очень информативен, поскольку указывает на то, что вирус оставил следы, а ушел ли сам – неизвестно.

При ВГС известны случаи самоизлечения, в то время как антитела против вируса остаются и продолжают циркулировать пожизненно (иммунологическая память). ПЦР заметно опережает образование антител и может выявить вирусную частицу уже через 1-1,5 недели, в то время как АТ могут появиться в интервале от 2 месяцев до полугода

Однако иной раз имеют место случаи, когда АТ положительны, а результат ПЦР – отрицательный. Такое иногда происходит при очень низком количестве вируса или при его «дремлющем» состоянии в печени без выхода в кровяное русло. Чтобы все-таки найти истину, у пациента берут повторный анализ, а то и не один.

ВПЧ (вирус папилломы человека), если не произойдет самоизлечение, тоже может, ничем себя не проявляя, долго персистировать в организме хозяина, который об этом даже не подозревает, поскольку ПЦР сделать не доводилось, а симптомы болезни отсутствовали. Однако наличие папилломовирусной инфекции, пусть и латентной, далеко не безразлично для здоровья человека, где особую опасность несут определенные типы вируса, вызывающие онкологические заболевания (типы 16, 18).

Чаще от ВПЧ страдает женская половина населения, так как вирус больше любит женскую половую сферу, а особенно – шейку матки, где некоторые типы вирусов способствуют развитию диспластических процессов, а затем и рака шейки матки, если не лечить дисплазию и дать волю вирусу. Так вот, полимеразная цепная реакция обнаружит вирусную ДНК, а затем укажет «плохой» или «хороший» (онкогенный или неонкогенный) тип поселился в организме женщины.

Очевидно, что полимеразная цепная реакция может найти любую чужеродную структуру, состоящую из нуклеиновых кислот, поэтому данный тест подходит для выявления всех ЗППП и TORCH-инфекций, тем не менее, он далеко не всегда используется. Зачем, скажем, проводить такие дорогие исследования для обнаружения трихомонады или гонококка, если есть более доступные и дешевые?

TORCH-инфекции и ИППП настолько взаимосвязаны, что, порой, трудно определить, к какой группе следует отнести тот или иной возбудитель. В них вообще бывает сложно разобраться, так как это довольно разнообразные группы микроорганизмов, которые могут передаваться половым путем всегда или только при определенных условиях (иммунодефицит), а могут представлять интерес лишь при беременности, ввиду возможного негативного влияния на ее течение и на плод.

В основе развития клинических проявлений лежат разные возбудители, найти которые бывает под силу только ПЦР, что и является ее основной задачей иногда совместно с ИФА, а иногда в качестве единственного подтверждающего теста, особенно, если симптоматика заболевания отсутствует. Такую непростую ситуацию может создавать полимикробная инфекция, которая, помимо явных возбудителей, включает еще и условно-патогенные.

ПОДРОБНОСТИ:   Частная гинекология черкесске

У мужчин, страдающих воспалительными заболеваниями половой сферы, например, уретритом, часто выявляют хламидию, уреаплазму и микоплазму. Эти же виды несут опасность и женскому организму. Те, кто знает коварство хламидии и сталкивался с ней, наверняка помнят, как тяжело бывает ее найти и распознать, поэтому анализу, произведенному методом ПЦР на хламидии, особенно доверяют, ведь спрятавшийся в клетке очень маленьких размеров паразит ведет себя осторожно, а вред наносит всегда исподтишка.

Уреаплазма зачастую рассматривается в паре с микоплазмой. И это неспроста. Данные виды, как и хламидию, не относят ни к вирусам, ни к бактериям, они проживают внутри клеток и относятся к ИППП, хотя их присутствие в здоровом организме тоже далеко не редкость. Так вот, чтобы отличить здорового носителя от больного человека, нужны особые методы, где ПЦР считается наиболее надежным, поскольку, ввиду особенностей строения и поведения этих микроорганизмов, другие исследования оказываются неэффективными.

Что касается вируса герпеса (тип 1, 2) и цитомегаловируса, который тоже относится к герпесвирусам (тип 5), то здесь тоже ситуация неоднозначная. Инфицированность населения земного шара приближается к 100%, поэтому в данном случае очень важна идентификация вируса и его доза, что особенно играет роль при беременности, ведь взрослому человеку, вирус, прижившийся в его организме, часто не доставляет никаких хлопот и признаков заболевания не дает.

В заключение хочется отметить, что такой замечательный метод, как ПЦР, вот уже более 30 лет служит человечеству. При этом, задачи теста не ограничиваются поиском возбудителей инфекционных заболеваний. Полимеразная цепная реакция, рожденная на почве молекулярной биологии, неразрывно связана с генетикой, она успешно применяется в криминалистике для идентификации личности, в судебной медицине для установления отцовства, в ветеринарии, если клиника для животных имеет возможности приобретать дорогое оборудование, а также в других сферах (промышленность, сельское хозяйство и пр.).

К основным недостаткам метода полимеразной цепной реакции относятся:

  1. Необходимость грамотного подхода к подбору последовательности праймеров. Конечно же, в лабораториях используются программы, существенно упрощающие поиск требуемых регионов ДНК, однако ни одна из имеющихся методик не гарантирует хорошую работу праймеров, ведь фактически они являются набором молекул разнообразного состава и длины.

    Это является причиной возникновения «минусовых» фракций, представляющих собой молекулы, последовательность которых укорочена на одно или несколько оснований, причем местоположение пропущенного нуклеотида в данной ситуации может быть любым. Именно поэтому получить качественный результат можно только после того, как эти фракции будут очищены.

  2. Сложности со смешиванием 4-х видов нуклеотидов. Различная пропорция нуклеотидов может повлечь за собой значительное увеличение ошибок ДНК-полимеразы в ходе амплификации. Именно поэтому в ходе ПЦР-анализа на инфекции требуется следить за концентрацией ионов магния ввиду того, что уменьшение катионов оказывает влияние на специфичность и температуру гибридизации праймеров.
  3. Необходимость соблюдения определенных технологий, а также тщательного соблюдения всех этапов исследования в изолированных друг от друга лабораторных зонах, обусловленная риском амплификации незначительных объемов неспецифических ДНК, способных привести к постановке неверного диагноза. Кроме того, ПЦР-анализ на инфекции больше используется для получения ответов на поставленные вопросы по принципу «да-нет», а именно о том, присутствует ли в образце возбудитель того или иного заболевания.

    А вот для определения того, какой микроорганизм из огромного количества существующих имеется в образце, этот анализ подходит замечательно. Обуславливается это тем, что метод ПЦР наиболее эффективен тогда, когда тестовая реакция содержит одну или несколько пар праймеров. Если же в одной реакции задействовано большее количество пар праймеров, соответствующих разнообразным инфекциям, появляется проблема, связанная с возникновением артефактов.

  4. Возможность неправильной интерпретации результатов анализов, связанная с тем, что определение ДНК возбудителя далеко не во всех случаях свидетельствует о том, насколько он жизнеспособен, а также о непосредственной связи обнаруженного инфекционного агента с тем или иным патологическим процессом.
  5. Возможность получения неверного результата в случае неправильного забора биоматериала. Строго говоря, для того, чтобы произвести качественный ПЦР-анализ, необходимо правильно забрать образцы биоматериала у пациента и правильно их подготовить.
  6. Необходимость максимально полного удаления антикоагулянтов и остатков гемма во время извлечения нуклеиновых кислот с целью обеспечения максимальной эффективности амплификации.
  7. Склонность ДНК-полимераз, используемых в ПЦР, к ошибкам.

ПЦР может работать в любой биологической среде

Метод ПЦР не отличается «кровожадностью», поэтому приемлет любую биологическую среду, содержащую предполагаемый инфекционный агент.Обычно выбор – что нужно взять для исследования, остается за врачом.

Таким образом, в поисках возбудителя, кроме анализа крови (хотя он тоже подходит и в большинстве случаях берется параллельно другому материалу), можно использовать:

  • Мазок (выделения урогенитального тракта);
  • Соскоб слизистых ротовой полости, конъюнктивы, носоглотки, половых путей (у женщин берут из шейки матки и влагалища, у мужчин – из уретры);
  • Слюну;
  • Сперму;
  • Сок предстательной железы;
  • Ткани плаценты и амниотиотическую жидкость (околоплодные воды);
  • Осадок мочи (после центрифугирования), например, для выявления некоторых ИППП и микобактерий туберкулеза;
  • Мокроту и плевральную жидкость с той же целью;
  • Экссудаты;
  • Спинномозговую жидкость при подозрении на инфекционное поражение ЦНС;
  • Биопсийный материал (биоптат), взятый из печени, 12-перстной кишки, желудка и пр.

Полимеразная цепная реакция гинекология

К вышеперечисленному хочется добавить, что материала для тестирования во всех случаях, даже в соскобах и выделениях, будет достаточно, так как тестирование методом ПЦР больших объемов не требует, анализу  хватает и нескольких микролитров, которые обычно берут в микропробирку типа «эппендорф» и отправляют на исследование.

Исследовать в данном случае можно практически все биологические жидкости: мочу, кровь, слюну, спинномозговую жидкость, отделяемое слизистых оболочек и раневых поверхностей, содержимое полостей тела. Забираются образцы для исследования ПЦР одноразовыми инструментами, после чего помещаются в стерильные пробирки из пластика или же на культуральные среды с последующим перемещением в лабораторию, занимающуюся этим видом исследований.

Основные недостатки метода полимеразной цепной реакции

К лаборатории, осуществляющей ПЦР-диагностику, предъявляются высочайшие требования в плане оборудования, тест-систем и квалификации медицинского персонала. Это высокотехнологичная лаборатория, располагающая арсеналом высокочувствительных и высокоспецифичных реагентов, поэтому особых недостатков она не имеет.

Врач, наблюдающий пациента, начинает сомневаться в достоверности результатов тестирования, поскольку никаких признаков заболевания не видит. Но все же, учитывая высокую чувствительность ПЦР-системы, следует помнить, что она обнаруживает возбудителя даже в доклинической стадии, а положительный результат в таком случае является скорее достоинством, чем недостатком. Исходя из этого, лечащий врач должен сам принять решение о целесообразности терапии, взяв во внимание и другие аргументы «за» и «против».

Преимущества диагностики с помощью полимеразной цепной реакции очевидны:

  • Высокая специфичность, достигающая 100%, обусловленная присутствием в отобранном образце частиц нуклеиновых кислот, присущих конкретному организму, но чужеродных человеку;
  • Высокая производительность, ведь ПЦР – высокотехнологичная автоматизированная методика, предоставляющая возможность проведения тестирования в день забора материала и избавления, таким образом, пациента от лишних треволнений;
  • ПЦР, работая над одной пробой, способна провести несколько исследований и обнаружить несколько возбудителей, если ей будет такое задание. Например, при диагностике хламидийной инфекции, где ПЦР относится к основным методам, наряду с хламидией, можно обнаружить и нейссерию (гонококк) – возбудитель гонореи. Причем, на достоверности результатов это негативно не отражается;
  • Тестирование методом ПЦР выявляет опасные микроорганизмы в инкубационном периоде, когда они еще не успели нанести ощутимый вред организму, то есть, ранняя диагностика предупреждает о грядущем развитии патологического процесса, что дает возможность подготовиться к нему и принять во всеоружии.

Кроме этого, во избежание недоразумений, иной раз возникающих при диагностике, ПЦР защищает себя еще и тем, что ее результаты могут  зафиксироваться (фотография, компьютер) с целью использования их в экспертных целях, если будет на то необходимость.

Нормой в ответах ПЦР считают отрицательный результат, указывающий на отсутствие фрагментов чужеродных нуклеиновых кислот, положительный ответ будет свидетельствовать о наличии инфекции в организме, цифровые значения означают состояние вируса и его концентрацию на момент тестирования. Однако полную расшифровку анализа осуществляет врач, прошедший специальную учебу по теме «ПЦР».

ПОДРОБНОСТИ:   Что Такое Спираль В Гинекологии ~ Повседневные вопросы

Теория – это, безусловно, замечательно, но что мы имеем на выходе? Какую практическую выгоду получает человек, когда отправляется на поиски вредоносных микроорганизмов, вооруженный ПЦР?

  • Безусловно, одно из главных достоинств — это универсальность метода. ПЦР позволяет обнаруживать любые ДНК и РНК, даже когда бессильны другие методы. Оборудование, используемое для ПЦР, стандартно, оно не зависит от того, что именно и где именно мы ищем.
  • Следующий плюс — высокая специфичность. В материале, направленном на исследование, определяется уникальная последовательность нуклеотидов, характерная только для конкретного возбудителя. Таким образом, можно говорить, что специфичность метода достигает 100%. Кроме того, это позволяет одновременно, в одном и том же материале, проводить поиск нескольких возбудителей без какого-либо ущерба для качества ответа.
  • Метод обладает высочайшей чувствительностью – мы уже говорили о том, что возможно найти всего один фрагмент генетического материала возбудителя.
  • Несомненное преимущество метода – оперативность. Постановка реакции занимает несколько часов, таким образом, вся диагностика, от момента сдачи материала на анализ до получения результата, отнимет всего один день.
  • При помощи ПЦР определяют возбудителя , а не реакцию на его внедрение со стороны организма. Таким образом, появилась возможность точно диагностировать заболевание еще в инкубационном периоде, когда нет никаких клинических или лабораторных признаков болезни.

Безусловно, ПЦР не идеальный метод, имеются и свои недостатки. Но они напрямую связаны с его достоинствами и с так называемым «человеческим фактором». ПЦР – очень высокотехнологичный метод, требующий соблюдения строжайших правил оснащения лаборатории. Достаточно сказать, что в помещении должен быть установлен фильтр биологической очистки со степенью 99,9%.

Оценивать результаты реакции должен практический врач, который лечит конкретного больного. Дело в том, что далеко не всегда положительный ответ теста означает наличие заболевания. Например, человек пролечился от какого-либо заболевания, но погибший и уже не опасный возбудитель будет еще некоторое время «разбираться на запчасти» защитной системой организма. Если в этот момент сделать ПЦР – результат окажется положительным.

Другой вариант – это отрицательный результат ПЦР при наличии даже явной клинической картины. Одна из наиболее возможных причин – материал для исследования был взят «не оттуда». Образец должен брать квалифицированный врач, строго следуя инструкции, которую ему дает лаборатория.

Где применяется диагностика методом ПЦР

Возможности диагностики инфекционных заболеваний с применением полимеразной цепной реакции велики, с ее помощью можно определить самые разнообразные вирусы, вызывающие такие инфекции как:

  • ВИЧ – ПЦР-диагностика ВИЧ очень эффективна для обнаружения вируса, который вызывают эту болезнь, блокирует защитные функции и открывает путь в организм человека всевозможным патологиям;
  • герпес – диагностика герпеса методом ПЦР может обнаружить вирус у человека только во время рецидива, этот способ позволяет установить какого он типа;
  • мочеполовые инфекции – ПЦР-диагностика урогенитальных инфекций (хламидиоз, уреаплазмоз, гарднереллез, микоплазмоз, трихомониаз, кандидоз и прочие) на сегодняшний день активно применяется, так как определить возбудителей ИППП с помощью традиционных анализов сложно, а диагностика инфекций методом ПЦР позволяет в минимальной пробе выявить наличие патогенных микроорганизмов и вовремя начать терапию;
  • гепатит – диагностика гепатита методом ПЦР является одним из важнейших шагов для определения причин его появления и назначения адекватной схемы лечения, без использования современных молекулярно-биологических методов поставить адекватный диагноз данной патологии невозможно;
  • листериоз – ПЦР-диагностика позволяет выявить даже единичных возбудителей данного заболевания в кратчайшие сроки;
  • цитомегаловирус – ПЦР-диагностика этого заболевания считается прогрессивной, но не дает возможность определить является ли инфекция первичной или повторной, другими словами не различает активный вирус от спящего;
  • туберкулез – ПЦР-диагностика туберкулеза помогает выявить наличие активной формы патологии в несколько раз оперативнее, чем другие исследования, также с помощью этого анализа можно осуществлять эпидемиологический контроль за бактериовыделителями на фоне кажущейся стабилизации состояния больного. Для диагностики туберкулеза у детей делают пробу Манту, если она положительная, то метод ПЦР позволяет с высокой точностью подтвердить установленный диагноз и определить не только туберкулез легких, но и поражение этим вирусом кожи, почек, кишечника и других органов;
  • вирус папилломы человека – ПЦР-диагностика ВПЧ используется для определения его типа и помогает определить количественные и качественные характеристики вируса;
  • клещевой энцефалит – результаты ПЦР при определении хронической формы заболевания являются самыми надежными;
  • глистная инвазия – диагностика паразитов помогает выявить инвазии простейшими, а также внутриклеточными паразитами, но он не позволяет определить степень тяжести заражения и количество вредителей в организме;
  • хеликобактерная инфекция – с помощью метода ПЦР возможно определение высокопатогенных и низкопатогенных штампов Хеликобактер Пилори, это важно для прогноза заболевания и эффективной терапии.

Это не полный список заболеваний, которые выявляются с помощью анализа ПЦР. Большинство этих патологий на ранней стадии практически незаметны, но последствия от их воздействия на организм крайне негативные и часто опасные для здоровья и жизни человека.

Беременным женщинам назначают анализ ПЦРК, чтобы выявить инфекции, передающиеся половым путем, значительно увеличивающие риск появления рака шейки матки, пагубно влияющие на протекание беременности и здоровье ребенка. Поэтому крайне важна диагностика ЗППП, чтобы не допустить заражение плода патогенными микроорганизмами.

Исходя из всего вышеперечисленного можно сделать вывод, что лабораторная диагностика с применением метода ПЦР помогает врачу установить точный диагноз и назначить эффективную терапию в каждом индивидуальном случае.

Вычленение ДНК является самым первым этапом проведения ПЦР-диагностики. Заключается он в следующем: забранные у больного образцы обрабатываются специальным образом, в результате чего сдвоенная спираль ДНК расщепляется на несколько нитей. Стоит отметить, что с целью обеспечения чистоты реакции в образцы добавляется определенная компонента, позволяющая растворить всю органику. Именно этим способом удаляются аминокислоты, углеводы, липиды, пептиды, полисахариды и белки. Вследствие всех этих манипуляций создается ДНК.

Необходимость подобных мероприятий обуславливается, прежде всего, тем, что в основе ПЦР-диагностики инфекций лежит создание новых ДНК или РНК инфекций. И, конечно, осуществить это, не удалив клеточный материал, нельзя.

ПОДРОБНОСТИ:   Гинекология в зеленограде бесплатно

Чего «боится» ПЦР, что она умеет и как к ней подготовиться?

Как в любых других исследованиях, иной раз результаты теста оказываются ложноположительными или ложноотрицательными, где ПЦР исключением не является. Подобное может происходить в случаях:

  1. Нарушения технологического процесса на одном из этапов реакции;
  2. Несоблюдения правил забора материала, его хранения или транспортировки;
  3. Присутствие посторонних примесей в материале.

Это говорит о том, что к ПЦР – диагностике инфекций нужно подходить внимательно, осторожно и аккуратно, иначе образцы материала могут поменять свое структурное строение или вовсе разрушиться.

ПЦР-диагностика инфекций относится к категории «золотых стандартов» среди других лабораторных методов, поэтому ее можно применить для поиска возбудителей многих заболеваний, на первый взгляд не имеющих ничего общего между собой:

  • Туберкулез различной локализации, пневмония (в том числе и атипичная, вызванная хламидией);
  • Детские инфекции (коревая краснуха, паротит, корь);
  • Дифтерия;
  • Сальмонеллез;
  • Зоонозная инфекционная болезнь – листериоз (заболевание характеризуется многообразием симптомов с поражением лимфоузлов, ЦНС, внутренних органов);
  • Заболевания, обусловленные проникновением вируса Эпштейн-Барра (инфекционный мононуклеоз и др.);
  • Онкологическая патология, спровоцированная папилломовирусной инфекцией (ВПЧ и его типы);
  • Боррелиоз (болезнь Лайма, клещевой энцефалит);
  • Хеликобактерная инфекция, возбудителем которой является проживающий в желудке человека микроб Helicobacter pylori. Доказано, что хеликобактер становится причиной развития рака желудка или 12-перстной кишки;
  • Кандидоз и практически все ЗППП.

ПЦР-диагностика инфекций, передающихся половым путем, имеет особую значимость, поскольку заболевания, вызванные таким образом, часто длительное время протекают без каких бы то ни было клинических проявлений, зато при беременности начинают активизироваться и, таким образом, угрожать здоровью и даже жизни ребенка.

Сразу заметим, что подготовка к ПЦР довольно простая, никаких особых усилий со стороны пациента не требующая. Нужно лишь выполнить три несложных задания:

  1. Не иметь половых контактов за 24 часа до того, как сдать анализ;
  2. Для забора и анализа крови из вены нужно прийти на голодный желудок, пить, кстати, тоже нельзя;
  3. Сдать мочу следует ночную (утром – в стерильную баночку, приобретенную накануне в аптеке).

Детекция ДНК-продуктов амплификации

Для того, чтобы осуществить амплификацию ДНК, используются ДНК-матрицы, представляющие собой молекулы ДНК инфекций, использующиеся с целью клонирования ДНК. В основе самой амплификации лежит присущий всем живым организмам процесс достраивания ДНК при помощи удвоения его единичной цепочки.

Именно поэтому, взяв единичный фрагмент ДНК, специалист, выявляющий заболевание методом полимеразной цепной реакции, способен скопировать его и увеличить до требуемого числа копий в режиме цепной реакции. Так, например, первый цикл копирования образует 2 фрагмента, второй – 4, а третий уже, соответственно, 8.

Причем цикл длится считанные минуты и позволяет изменить температуру в микроскопическом химическом реакторе, содержащем все требуемые для воссоздания компоненты. В ходе присоединения искусственно созданных участков ДНК, ничем не отличающихся от ДНК вирусов и бактерий, создаются две короткие спирали, позволяющие воспроизвести будущую ДНК и включающие в свой состав 2 цепи участков ДНК.

В процессе амплификации применяется специфический участок ДНК-полимеразы и давший название тесту ПЦР, о котором идет речь в данной статье. Полимераза выступает в качестве катализатора реакции и обеспечивает прикрепление нуклеотидных оснований к увеличивающейся цепи ДНК, носящее последовательный характер. Это означает, что процесс амплификации ДНК является неоднократным возрастанием числа копий ДНК, присущих тому или иному микроорганизму.

Именно поэтому необходимость достраивания всей цепи ДНК для того, чтобы выявить возбудителя, отсутствует. Необходим лишь участок, присущий тому или иному микроорганизму. Производится анализ ПЦР на скрытые инфекции на специально программируемом оборудовании, а именно на амплификаторе или на ПЦР-термостате. Причем в зависимости от разновидности выявляемой инфекции данный процесс занимает не более 2-3 часов.

В ходе детекции результатов ПЦР продукты, получившиеся в ходе амплификации, разделяются. Параллельно с этим к смеси добавляются вещества, наделяющие фрагменты ДНК способностью к яркому свечению, говорящему о наличии болезнетворных элементов в исследуемом материале.

К основным преимуществам метода полимеразной цепной реакции можно отнести:

  1. Возможность выявления того или иного возбудителя напрямую. Подавляющее большинство классических методов лабораторной диагностики позволяют определить вирусы и микробы исключительно по присущим им косвенным признакам. Так, например, ИФА-диагностика позволяет обнаружить в крови заболевших белки, образованные в ходе распада возбудителей болезней. Метод же ПЦР дает возможность увидеть специфический участок ДНК возбудителя.
  2. Высокую специфичность. В ходе изучения образцов, забранных у пациента, выделяется присущий только тому или иному возбудителю уникальный фрагмент ДНК.
  3. Высокую чувствительность. Выявление болезнетворных микроорганизмов возможно даже тогда, когда в человеческом организме присутствует всего один представитель своего вида.
  4. Универсальность. На сегодняшний день реакция ПЦР может быть получена практически при любом биологическом материале – от мочи и до соскоба клеток эпителия.
  5. Быстроту получения результата. Благодаря универсальности способа обработки предоставленного для анализа материала, распознаванию продуктов реакции, а также использованию современного оборудования произвести диагностику ПЦР ДНК можно всего за 5-6 часов.
  6. Возможность определения самых разнообразных возбудителей. Метод ПЦР-диагностики настолько чувствителен, что дает возможность определить возбудителя не только у больного, страдающего заболеванием в острой стадии, но и при хронической форме заболевания.

Какие инфекции выявляет ПЦР?

На сегодняшний день к числу ПЦР инфекций можно отнести:

  • пневмонию и дифтерию бактериальной и вирусной формы, туберкулез;
  • болезни ЖКТ, обусловленные присутствием в организме бактерии Helicobacter Pilori;
  • болезни, обусловленные наличием в организме сальмонеллы, холерного вибриона, боррелий;
  • инфекции, носящие вирусный характер, например, ВИЧ, вирусы папилломы человека, герпеса, гепатита, онковирусы и ретровирусы;
  • инфекционный мононуклеоз;
  • заболевания, обусловленные генетическими особенностями человека;
  • ЗППП, например, гарднереллез, уреаплазмоз, микоплазмоз, хламидиоз, трихомониаз;
  • клещевой энцефалит;
  • цитомегаловирусную инфекцию;
  • кандидоз;
  • листероз и многие другие заболевания, на протяжении многих лет способные присутствовать в человеческом организме в скрытом виде.

Как расшифровывается ПЦР-анализ?

Ответ на вопрос о том, как расшифровывается ПЦР-анализ, волнует большинство из тех пациентов, кто сдал его впервые. В данном случае все достаточно просто. После того, как исследование будет закончено, пациент получает либо положительный, либо отрицательный результат. Естественно, что положительные результаты анализа будут говорить о наличии в организме той или иной инфекции, а отрицательные – о том, что в организме больного та или иная инфекция отсутствует, т.е. в биологическом материале, забранном у больного, ничего не было обнаружено.

Несмотря на кажущуюся простоту расшифровки, трактовать результаты анализов должен только ваш лечащий врач, который и назначил прохождение данного анализа. Причем расстраиваться в случае получения положительных результатов не стоит, ведь ПЦР методика в данном случае выявила заболевание, что означает, что в ближайшем времени будут приняты все меры по его скорейшему излечению. И главное здесь – не пытаться заниматься самолечением и не игнорировать этот процесс, растягивая срок болезни.


Автор статей
Серафимова Наталья - публикует и подбирает материалы для сайта, является заведующей муниципальной женской консультации. Профессор. Преподает гинекологию в медицинском университете.
Присоединяйтесь к нам в VK
Присоединяйтесь к нам в Одноклассниках